表12组临床疗效比较
Table1Comparisonofclinicalefficacybetweentwogroups(n=40，例数，%)
曹 华
(山东省菏泽开发区中心医院妇产科，山东 菏泽 274000)
[摘要]目的观察深部热疗联合全身化疗治疗晚期卵巢癌的临床效果及对核苷酸切除修复互补基因1(excision repair cross complementing 1，ERCC1)、β链蛋白(β-catenin)及β微管蛋白Ⅲ(β-tubulin Ⅲ)表达的影响。方法选取晚期卵巢癌患者80例，按照随机数字表法分为2组，对照组使用紫杉醇联合顺铂化疗，观察组在对照组的基础上进行深部热疗。比较2组临床疗效，静脉血中ERCC1、β-catenin及β-tubulin Ⅲ水平，生存率和不良反应发生率。结果观察组肿瘤缓解率和腹腔积液控制率均明显高于对照组， ERCC1和β-catenin的mRNA表达和蛋白含量均明显低于对照组，平均生存时间明显长于对照组，2年后生存率明显高于对照组，胃肠道和骨髓抑制发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论使用深部热疗联合全身化疗对β-tubulin Ⅲ无明显影响，但可有效抑制ERCC1、β-catenin基因的表达，提高治疗效果，减轻不良反应，有效延长患者的生存期并提高患者的生存质量。
[关键词]卵巢肿瘤；高温，诱发；药物疗法
doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2018.01.014
卵巢癌在女性中具有极高的发病率，并且大多数患者在发现时已处于卵巢癌晚期[1]。对于早期、中期卵巢癌，临床上已有较为成熟的治疗方法和较好的治疗效果，但是对于晚期卵巢癌，常规的手术治疗或者化疗等方法均无法获得较好的临床效果[2]。研究发现，肿瘤细胞对于热度非常敏感，热疗法可以使肿瘤细胞坏死，使用深部热疗联合化疗可增加治疗效果[3]。核苷酸切除修复互补基因1(excision repair cross complementing 1，ERCC1)、β链蛋白(β-catenin)及β微管蛋白Ⅲ(β-tubulin Ⅲ)与卵巢癌的发病和治疗效果有密切联系，ERCC 1基因是核苷酸切除修复的关键，可影响卵巢癌患者对化疗药物的敏感性和治疗预后；β-tubulin Ⅲ与紫杉醇的耐药性密切相关；而β-catenin也与卵巢癌细胞的凋亡相关[4]。本研究采用深部热疗联合化疗治疗晚期卵巢癌，经观察可明显抑制ERCC1、β-catenin和β-tubulin Ⅲ的表达，现报告如下。
1.1一般资料 选取2013年5月—2015年5月于我院接受治疗的晚期卵巢癌患者80例。纳入标准：①均经病理学检查确诊为卵巢癌；②卵巢癌分期为Ⅲ期或Ⅳ期[5]；③均经CT扫描和磁共振扫描未发现淋巴结转移；④预计生存期均大于6个月；⑤均在治疗后2年内接受随访；⑥患者及其家属知情并签署知情同意书。排除标准：①年龄小于30岁和大于70岁的患者；②曾接受过卵巢癌放疗或化疗的患者；③合并严重肝肾疾病和心血管疾病的患者；④有盆腔手术史的患者；⑤处于哺乳期或妊娠期的妇女；⑥未签署知情同意书的患者。按照随机数字表法分为对照组和观察组。对照组40例，年龄37～69岁，平均(53.5±3.9)岁，卵巢癌Ⅲ期27例、Ⅳ期13例；观察组40例，年龄35～69岁，平均(51.3±3.6)岁，卵巢癌Ⅲ期27例、Ⅳ期患者13例。2组年龄、卵巢癌分期差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
本研究经过医院伦理委员会批准。
1.2治疗方法 2组均使用静脉注射紫杉醇(海正辉瑞制药有限公司，国药准字H20059378)和顺铂(齐鲁制药海南有限公司，国药准字H20073653)进行全身化疗治疗。首先进行抗敏处理：在使用紫杉醇前12 h和6 h口服地塞松(国药集团容生制药有限公司，国药准字H41020096)20 mg，30 min前静脉输注异丙嗪(西南药业股份有限公司，国药准字H50020140)25～50 mg，并在20 min前静脉输注西咪替丁(国药集团容生制药有限公司，国药准字H20058427)300 mg。使用紫杉醇 175 mg/m2，24 h后使用顺铂75 mg/m2，每2周重复1次。观察组在对照组的基础上同期使用内生场肿瘤热疗系统(吉林迈达，NRL-004)进行深部热疗，患者平卧，腹部位于加热中心，使用水袋将人体与电极隔离，加热温度保持盆腔内温度<44 ℃，肛温<40 ℃，每次50 min，每次间隔>3 d。2组均进行4周的治疗。在治疗过程中密切监视患者的基本体征和临床症状，出现不良反应及时处理。
1.3观察指标
1.3.1近期疗效 治疗4周后，依据实体瘤疗效评价标准[5]对患者肿瘤缓解和腹腔积液控制(4周内腹腔积液总体积减少百分比大于50%或治疗结束后腹腔积液总体积增加百分比小于25%)进行判定。
1.3.2ERCC1、β-catenin及β-tubulin Ⅲ的mRNA表达和蛋白水平 接受治疗4周后取清晨空腹静脉血，离心10 min(3 000 r/min)后取上清液，使用荧光定量PCR法进行检测，引物序列为：ERCC1上游5′-TTGGCGACGTAATTCCCGA-3，下游5′-CAGGTTCTGGTAGCGGAGG-3′；β-tubulin Ⅲ上游5′-GTTCTGGGAAGTCATCAGTGATGA-3′，下游5′-GTCCGAGTCGCCCACGTA-3′；β-catenin上游5′-GCCACAGGATTACAAGAAGC-3′，下游5′-CCACCAGAGTGAAAAGAACG-3′；GAPDH上游5′-CCTCAAGATCATCAGCAAT-3′，下游5′-CCATC-CACAGTCTTCTGGGT-3′。ERCC1、β-catenin及β-tubulin Ⅲ引物(上海，Invitrogen)，95 ℃条件下预变性5 min，后变性10 s，ERCC1、β-catenin在60 ℃下退火延伸15 s，β-tubulin Ⅲ在58 ℃下退火延伸15 s，再在72 ℃下退火延伸20 s，以上退火延伸步骤循环40次。3种基因Ct值采用2-△△Ct法进行计算，采用GAPDH法进行校正。采用ELISA法按照试剂盒(联科生物科技有限公司)相应步骤测定ERCC1、β-catenin及β-tubulin Ⅲ蛋白含量。
1.3.3不良反应及患者生存率 密切观察并记录患者出现的不良反应；对患者进行为期4～24个月的随访，随访期间统计患者的生存率。
1.4统计学方法 应用SPSS 19.0统计学软件分析数据。计量资料比较采用独立样本t检验；计数资料比较采用χ2检验；生存率计算采用ROC生存曲线分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2.1临床疗效比较 治疗结束后，观察组肿瘤缓解率和腹腔积液控制率均明显高于对照组(P<0.05)，见表1。
表12组临床疗效比较
Table1Comparisonofclinicalefficacybetweentwogroups(n=40，例数，%)
2.2治疗后ERCC1、β-catenin及β-tubulin Ⅲ水平比较 治疗结束后，观察组ERCC1和β-catenin的mRNA表达和蛋白水平均明显低于对照组(P<0.05)；2组β-tubulin 的mRNA表达和蛋白水平差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。
表22组治疗前后ERCC1、β-catenin及β-tubulin水平比较
Table2ThelevelsofERCC1,β-cateninandβ-tubulininthetwogroupswerecomparedbeforeandaftertreatment
2.3生存率比较 观察组平均生存时间[(19.74±2.37)个月]明显长于对照组[(12.68±3.57)个月](t=5.939，P=0.000)；接受治疗后2年，观察组生存率显著高于对照组(P<0.05)，2组生存曲线见图1。
图12组生存曲线比较
Figure1Comparisonofthesurvivalproportionsbetweentwogroups
2.4不良反应发生率比较 观察组胃肠道不良反应和骨髓抑制发生率明显低于对照组(P<0.05)；2组神经毒性和肝肾功能损伤发生率差异均无统计学意义(P>0.05)。见表4。
表42组不良反应比较
Table4Comparisonofadversereactionsbetweentwogroups(n=40，例数，%)
卵巢癌在发现时有70%～80%已达到晚期，化疗是治疗卵巢癌最常用的方法之一[6]。紫杉醇联合顺铂是临床上治疗卵巢癌的“金标准”，但是该方法疗效有限，并且治疗过程中往往会发生较为严重的不良反应，使其在临床的应用受到很大限制[7]。因此，寻求一种能有效治疗卵巢癌，且减少不良反应的治疗方法具有重要意义。热疗是一种古老的治疗方法，当肿瘤组织的温度达到42～45 ℃并维持一定时间后，肿瘤细胞的生长会受到抑制甚至导致细胞死亡。由于肿瘤组织部位血管往往有大量血管无序生长，具有热聚现象，这使得肿瘤部位组织温度升高较其他组织快，故热疗法对普通组织细胞损害很小[8]。有研究发现，热疗法可改变化疗药物在组织中的分布，增加肿瘤组织药物的浓度，并促进细胞对药物的吸收；同时热疗法可促进热休克蛋白的产生，增强机体的免疫力[9]。
本研究结果显示，观察组肿瘤缓解率和腹腔积液控制率均明显高于对照组，有效改善了患者由于腹腔积液增加导致的腹胀现象，提高了患者生活质量。这可能是热疗与化疗产生协同作用的结果。谷潇等[10]研究发现热疗可有效提高化疗的临床效果。
ERCC1基因的表达与促进肿瘤细胞的DNA的损伤修复有关，更重要的是，ERCC1基因与肿瘤对于铂类化疗药物的耐药性密切相关[11]；而β-tubulin Ⅲ是抗微管类药物作用的最主要靶点之一，当抗微管药物作用于肿瘤组织时，肿瘤细胞会增加β-tubulin Ⅲ的生成，从而产生耐药性[12]。本研究发现使用深部热疗联合紫杉醇和顺铂化疗可有效抑制ERCC1基因的mRNA和蛋白的水平，这说明联合热疗可有效抑制ERCC1基因的表达，提高药物对肿瘤细胞的杀伤力，增加化疗效果。β-catenin也是一种与铂类药物耐药性相关的蛋白[13]，但是本研究结果显示2组β-catenin基因表达差异无统计学意义，这可能与样本量不足有关，故对于β-catenin是否可作为晚期卵巢癌判定指标仍需大量样本的试验证明。
热疗法不但可以提高治疗的临床效果，还可以有效减少治疗的不良反应，并增加患者的生存率。因为对于肿瘤部位进行热疗可使肿瘤部位血管通透性和肿瘤细胞通透性增加，使药物在肿瘤细胞内的浓度大于其他细胞，可在一定程度上增加药物的靶向性，减少化疗药物对正常细胞的影响；同时，由于肿瘤组织的热聚现象，使得热疗对于正常组织细胞的影响很小，呕吐等更易控制，可有效减少患者的不良反应，提高患者的生存质量[14]。表明热疗联合化疗可提高治疗效果并减少不良反应发生，从而更有助于患者身体的恢复，提高了患者生存率。
由于本研究的样本量有限，并且患者的地域来源单一，其结果可能存在一定的误差，热疗联合全身化疗对于ERCC1、β-catenin、β-tubulin Ⅲ水平和不良反应的影响仍需进一步的研究探讨。但除去以上因素，本研究选用了熟练固定的操作人员，尽量避免了人为因素的干扰。
综上所述，对晚期卵巢癌患者进行腹盆腔深部热疗联合全身化疗，可有效抑制ERCC1、β-catenin基因的表达，防止抗癌药物产生耐药性，提高化疗药物敏感性，提高临床疗效，同时能够明显降低不良反应发生率，提高患者生活质量，故值得临床推广应用。
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CAO Hua
(DepartmentofGynaecology,CenterHospitalofHezeDevelopmentZone,ShandongProvince,Heze274000,China)
[Abstract]ObjectiveTo study the clinical efficacy of deep hyperthermia combined with systemic chemotherapy in the treatment of advanced ovarian cancer and the effect on excision repair cross complementing 1(ERCC1), β-catenin and β-tubulin Ⅲ expression.MethodsA total of 80 patients with advanced ovarian cancer treated in our hospital from May 2013 to May 2015 were randomly selected. The control group
receivedpaclitaxel combined with cisplatin chemotherapy. The observation group was treated with deep hyperthermia on the basis of the control group. The levels of ERCC1, β-catenin and β-tubulin Ⅲ in the two groups were statistically analyzed, and the survival rate and adverse reactions were analyzed.ResultsThe effective rates of tumor remission and ascites control in the observation group were significantly higher than those in the control group. The mRNA and protein levels of ERCC1 and β-catenin in the observation group were significantly lower than those in the control group. The mean survival time of the observation group was significantly longer than that of the control group, and the survival rate of the observation group was significantly higher than that of the control group. The incidence of myelosuppression was significantly lower in the observation group than that in the control group(P<0.05).ConclusionThe use of deep hyperthermia combined with systemic chemotherapy can effectively inhibit the expression of ERCC1 and β-catenin genes, improve the therapeutic effect, reduce the incidence of adverse reactions, effectively prolong the survival of patients and improve the quality of life of patients.
[Key words]ovarian neoplasms； hyperthermia, induced； drug therapy
[收稿日期]2017-01-20；
[修回日期]2017-08-16
[作者简介]曹华(1978-)，女，山东菏泽人，山东省菏泽开发区中心医院主治医师，医学学士，从事妇科疾病诊治研究。
[中图分类号]R737.31
[文献标志码]A
[文章编号]1007-3205(2018)01-0064-04
(本文编辑：赵丽洁)