miRNA在乳腺癌诊断、预后和预测中的应用

(1.河北医科大学生物化学与分子生物学教研室，河北石家庄 050017;2. 河北医科大学第四医院外科, 河北石家庄 050011)

[关键词]乳腺肿瘤；微RNAs；标志物 doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2018.09.027

乳腺癌是世界上最常见的恶性疾病之一，每年估计有150万例新发病例[1]，严重影响人类的健康。由于缺乏敏感性和特异性俱佳的生物标志物，故尚不能实现对乳腺癌的早期诊断和治疗。外周血循环核酸在乳腺癌诊断、预后和监测抗癌治疗反应中起重要作用。鉴于微小RNA(microRNA，miRNA)的易分离性和稳定性的特点，循环miRNA受到了越来越多的关注。现就miRNA在乳腺癌诊断、预后和预测中的应用综述如下。

1 miRNA与乳腺癌概述

1.1miRNA miRNA是含19～23个核苷酸的短单链RNA序列，miRNA在不同种类癌症组织中均有表达的异常变化。miRNA通过对靶基因3′非翻译区中的互补序列进行碱基配对介导靶基因抑制，导致转录物不稳定、翻译抑制等情况。最近的研究报道，miRNA也可以通过与其他区域(包括蛋白质编码的外显子)结合调节基因表达[2]，甚至可以诱导哺乳动物细胞中的基因表达。

1.2miRNA在乳腺癌中的作用根据miRNA在乳腺癌中的表达变化及作用将其分为抑癌miRNA和原癌miRNA。let-7是已知的抑癌miRNA，在肿瘤组织中经常表达下调;其靶向定位LIN28，并且自身是LIN28负反馈调节的靶标。LIN28蛋白在包括乳腺癌在内的许多肿瘤中表达上调[3]。还有研究发现let-7通过靶向调节H-ras基因和高迁移率族蛋白(high mobility group protein,HMG)A调节乳腺癌肿瘤激活细胞(tumor-initiating cells,T-IC)2[4]。 miR-200家族也具有肿瘤抑制作用[5]。该家族由5个成员组成，分别组成1和12号染色体上的2个簇，即簇Ⅰ(miR-200b/200a/429)和簇Ⅱ(miR-200c/141)，其在上皮细胞间质转型(epithelial-mesenchymal transition,EMT)时被抑制，这与乳腺癌细胞迁移和侵袭性增加有关。miR-200家族成员在乳腺癌激活细胞中调节B细胞特异的莫罗尼白血病插入位点1基因的表达，并且通过抑制E盒结合锌指蛋白(zinc finger E-box binding hemeobox,ZEB)1和2抑制EMT。另有研究表明在乳腺癌细胞中，miR-200c的调控会影响细胞迁移和侵袭，miR-200c通过靶向定位肌动蛋白调节物，蛋白磷酸酶和Mg2+/Mn2+-依赖性因子(Mg2+/Mn2+-dependent factor,PPMF)1调节独立于ZEB/E-钙黏蛋白轴的转化生长因子β诱导的压力纤维蛋白的形成[6]。MiR-335通常在乳腺癌中沉默，通过靶向SRY相关的高迁移率族蛋白转录因子4和细胞外基质蛋白腱生蛋白C抑制肿瘤细胞的转移。

MiR-10b在转移性乳腺癌细胞系中作为致癌miRNA而被首次发现[7]。miR-10b水平与各种晚期癌症恶性程度相关。与早期原发性肿瘤相比，其在转移性肿瘤中表达上调。miR-10b直接靶向定位同源异型盒D10和Kruppel样因子4 。miR-21也是致癌因子，其能够抑制乳腺癌抑制基因的表达，从而促进肿瘤细胞生长、侵袭和转移。 miR-21的靶点，包括原肌球蛋白1α和程序性细胞坏死因子4[8]。MiR-21也靶向定位于10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物[9]以促进MCF-7型腺癌细胞生长[10]。

miR-155是的另一种致癌miRNA[11];其可以调节与细胞生长和存活有关的多重信号通路。人乳腺癌易感基因(breast cancer susceptibility gene,BRCA)1与DNA修复和细胞周期密切相关。miR-155靶向定位BRCA1，从而参与细胞修复以及影响细胞周期。miR-155还可以负调节与乳腺癌进展相关的其他基因(如细胞因子信号传导抑制因子1)。MiR-34a通常在乳腺癌中下调，这会使得沉默信息调节因子2相关酶1和B淋巴细胞瘤2基因的上调促进乳腺癌生长和存活[12-13]。miR-205经常在转移性乳腺癌中下调，miR-205的缺失使人表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor，HER)3、血管内皮生长因子A、ZEB1和ZEB2蛋白上调，从而促进乳腺癌细胞生长和侵袭(图1)。

图1 mi-RNA在乳腺癌中的相互作用
注：↑表明基因或mi-RNA上调；↓代表基因或miRNA在乳腺癌组织中被下调；(-)为负性调节

2 miRNAs与乳腺癌细胞微环境

细胞外基质和许多基质细胞，包括血管内皮细胞、淋巴管内皮细胞、癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)、肿瘤相关巨噬细胞、间充质干细胞、免疫细胞、白细胞和脂肪细胞构成肿瘤微环境[14-15]。原发肿瘤有能力创造一种微环境与肿瘤发生部位相毗邻，被称为转移前肿瘤微环境。转移前微环境被发现有6个特征：能够促进以下过程、免疫抑制、炎症、血管生成/血管通透性、淋巴管生成、向器官性和重新排布[16]。转移细胞的miRNA能够促进转移性细胞向远处组织迁移、侵袭以及种植[17]。miRNAs也可以促进乳腺癌间质细胞的恶性转化。CAFs通过癌细胞之间的沟通，在癌症细胞转移过程中扮演重要角色[18]。CAFs由正常的成纤维细胞(normal fibroblasts,NFS)接受癌细胞分泌的生长因子和炎症因子的刺激后产生[19-20]。Baroni等[21]研究表明，人乳腺成纤维细胞可通过癌细胞分泌的miR-9获得类似CAFs的特性。miR-9能提高NFS的体外迁移率，并促进体内肿瘤生长。这一现象被瞬时转染miR-9的NFS证实。 Zhou等[22]报道MDA-MBB-231细胞分泌的miRNA与mcf10a细胞的分泌miRNA不同，可调节人微血管内皮细胞的迁移。miR-105在转移性乳腺癌细胞中过表达，并能够在内皮细胞中表达。此外， miR-105还可能通过下调胞质紧密连接蛋白1(zonula occludens-1，ZO-1)在一定程度上破坏人微血管内皮细胞单层膜的屏障功能。胞外体miR-105通过诱导血管通透性增强促进癌细胞的转移。转移的进展是通过上调miR-105在MCF-10A来源的致瘤细胞株的表达实现的。并且MDA-MB-231乳腺癌细胞中的miR-105抑制作用能够抑制癌细胞的转移并恢复血管的完整性。最终测量了miR-105和ZO-1的血清表达，表明miR-105与ZO-1的表达和转移有关，提示miR-105是转移性乳腺癌的一个潜在生物标志物[22]。Di Modica等[23]研究显示，miR-939来源于三阴性乳腺癌细胞，也可通过靶向定位于VE-钙黏素 (VE-cadherin，一种参与维持血管通透性的连接蛋白)破坏内皮的屏障功能。此外，miR-939与三阴性乳腺癌细胞患者预后差有关。Tominaga等[24]研究显示，来源于大脑转移癌细的miR-181c能够破坏血脑屏障，并建立了乳腺癌细胞株，即BMD2a和BMD2b，这些细胞系具有脑转移能力。在此基础上， He等[25]构建了一种血脑屏障体外模型，该模型由脑毛细血管内皮细胞、脑周细胞和星形胶质细胞组成。将BMD2a和BMD2b的胞外膜泡(extracellular vesicles,EVS)添加到上述模型中，观察肿瘤细胞对血脑屏障的高侵袭性。同样，EVS促进脑转移和紧密连接蛋白，即Claudin-5、occluin、ZO-1、N-cadherin(一种钙依赖性细胞间黏附蛋白)的定位，而且肌动蛋白在体内的定位出现明显的变化。miR-181c在脑转移癌细胞中表达过高。因此，得出结论：miR-181 c通过对上述蛋白的异常定位以及靶基因的下调而破坏血脑屏障。Fong等[26]研究了涉及转移前微环境的葡萄糖代谢的重编程能够促进糖代谢。结果表明，miR-122在体外可通过抑制糖代谢抑制基质细胞的增殖，而miR-122是乳腺癌细胞过度分泌的产物。M2型丙酮酸激酶为miR-122的靶点，其能够减轻miR-122对葡萄糖摄取的抑制作用。Hannafon等[27]确定一个具有抗血管生成和抗肿瘤作用天然化合物，名为二十二碳六烯酸，其能上调乳腺癌miRNAs-7a、miR-23b、miR-27a/b、miR-21、let-7和miR-320b，证实了其抗血管生成的特点。在内皮细胞中，过表达 miR-23b 和miR-320b能够通过靶向定位尿激酶型纤溶酶原激活因子、血管动蛋白样蛋白1、神经纤毛蛋白1抑制血管生成[27]。先前的研究表明，CAFs分泌趋化因子和细胞因子，如肝细胞生长因子和基质细胞衍生因子1，导致肿瘤转化，并增强了肿瘤微环境中的炎症和血管生成[28-30]。此外，在CAF外泌体中miR-21、miR-378 e和miR-143的表达水平高于NFS[31]。

3 循环miRNA作为乳腺癌生物标志物

3.1循环miRNA作为诊断生物标志物 Cuk等[32]探讨了2组乳腺癌组织中miR-127-3p、miR-148b、miR-376a、miR-376c、miR-409-3p、miR-652、miR-801的诊断潜力，观察到在乳腺癌患者中这些miRNA的表达上调，在乳腺癌Ⅰ期和Ⅱ期中miR-127-3p、miR-148b、miR-409-3p、miR-652、miR-801升高，表明它们可以用于早期诊断。另一项研究对乳腺癌患者和健康对照组血浆样品中的miRNA进行分析显示，43种miRNA的表达有差异，乳腺癌患者中miR-148b、miR-133a、miR-409-3p高表达[33]。最近的一项研究发现，与健康对照组比较，乳腺癌患者中miR-15a、miR-18a、miR-107、miR-133a、miR-139-5p、miR-143、miR-145、miR-365、miR-425表达上调[34]。另有研究者使用Taqman基因芯片技术研究早期乳腺癌患者和健康对照组中循环miR-484表达水平，发现在乳腺癌患者中更高[35]。在乳腺癌肿瘤患者和健康对照组血清样品中miRNA表达的全局分析显示，miR-1、miR-92a、miR-133a和miR-133b是乳腺癌血清中上调最明显的生物标志物[36]。Wang等[37]评估了乳腺癌患者循环miR-182的诊断潜力，与健康对照相比，乳腺癌患者循环miR-182的表达上调，并且在乳腺癌组织中高表达，表明其可以用作潜在的诊断生物标志物。尽管上述研究中，乳腺癌与miRNAs具有良好的一致性，但也有研究表明循环miRNA是非肿瘤源性的。Waters等[38]应用小鼠乳腺癌模型评估肿瘤进展期间循环miRNA表达的变化，发现小鼠乳腺癌模型中miR-138表达上调，并且其在乳腺癌患者血清中表达也上调。但乳腺癌组织本身并没有观察到miR-138表达水平的变化。

乳腺癌组织的miRNA表达谱显示，某些miRNA相关的表达模式与乳腺癌分子亚型、雌激素受体状态或其他病理特征相关[39]。因此，一些研究评估了循环miRNA在乳腺癌疾病分类中的潜在功能。Nassar等[40]研究发现，miR-155在孕激素受体阳性患者中高度表达。Wang等[41]观察到与正常组织相比，乳腺癌组织中miR-21、miR-106a和miR-155表达上调，而miR-126、miR-199a和miR-335表达下调，且miR-21、miR-126、miR-155、miR-199a和miR-335的表达水平与组织学肿瘤分级和性激素受体表达相关。

3.2循环miRNA作为疾病预后生物标志物侵袭性乳腺癌患者的血清miR-202过表达与总体生存率降低呈正相关[42]。有研究尝试将miR-10b和miR-373循环水平作为检测乳腺癌淋巴结转移的生物标志物，与正常对照和没有转移的患者相比较，术前乳腺癌淋巴结转移患者血浆中miR-10b和miR-373表达水平较高[43]。另一项研究指出在原发性(M0)乳腺癌患者和转移性(M1)乳腺癌患者以及健康对照者中循环miR-34a表达上调与肿瘤分期相关，而miR-10b、miR-34a和miR-155表达上调与转移相关[44]。 Shaker等[45]发现miR-155和miR-205的表达与乳腺癌远处转移密切相关，与试验组乳腺癌相比，对早期乳腺癌和健康对照患者血清样品进行miRNA表达谱分析显示，miR-92a表达在组织和血清中早期下调，而miR-21的表达上调。此外，血清miR-92a和miR-21的表达水平与肿瘤大小和淋巴结转移存在相关性。miR-21-5p、miR-375、miR-205-5p和miR-194-5p表达上调和miR-382-5p、miR-376c-3p和miR-411-5p表达下调与乳腺癌复发相关[46]。另一项研究报道，循环miRNA表达与乳腺癌亚型有关联性，作者检测了M0和M1乳腺癌患者以及健康对照组血清中miR-10b、miR-17、miR-34a、miR-93、miR-155、miR-373的表达水平，结果显示M1期miR-17和miR-155的表达水平显着高于M0期，miR-373表达上调与原发性肿瘤的HER2阴性状态有相关性，而miR-17和miR-34a表达水平与孕激素受体或雌激素受体状态相关[47]。

3.3循环miRNA作为预测生物标志物在一项研究中，在浸润性导管癌和术前辅助化疗的乳腺癌患者血清中miR-10b、miR-34a、miR-125b、miR-155表达水平高于正常对照组，其中在化疗不明显的乳腺癌患者中miR-125b表达水平更高，这表明miR-125b的表达与乳腺癌化疗耐药性之间可能存在相关性[48]。Wu等[49]对接受辅助化疗后局部手术切除肿瘤的Ⅱ～Ⅲ期乳腺癌患者进行了循环miRNA的测序，观察到miR-375表达下调和miR-122表达上调可用来区分复发和非复发患者，而在接受新辅助化疗的患者miR-375、miR-184、miR-1299和miR-196a表达上调，miR-381、miR-410和miR-1246表达下调，作者随后在第2组Ⅱ～Ⅲ期乳腺癌患者中发现了miR-122，并证实了循环miR-122表达上调与患者复发之间呈显着相关性，表明miR-122和miR-375在观察化疗疗效和预测乳腺癌复发方面有很大的应用前景。Sun等[50]检测乳腺癌患者与正常对照组血清中miR-155的表达水平，发现乳腺癌miR-155表达上调，且在术后和4个疗程化疗后血清中miR-155表达上调，表明miR-155有作为治疗反应指标的潜力。见表1。

表1 循环mi-RNA在乳腺癌中作为诊断、预后和预测的标记物

表1(续)

注：↑代表基因或mi-RNA表达上调；↓代表基因或mi-RNA表达下调

3.4miRNA作为乳腺癌生物标志物的局限性建立一个准确可靠的用于乳腺癌诊断、预后和预测治疗反应的循环miRNA几乎每一步均具有挑战性[51]。第一，样品选择和处理，使用血清或血浆，以避免溶血造成的样品浪费，并采用标准化方案处理和收集。第二，癌症患者化疗前后miRNA水平波动[52-53]，为了消除这个问题，可以按照用药前、用药时和用药后3个阶段收集血液样本。第三，miRNA测量平台的选择，基于qRT-PCR技术，虽然这种方法比其他方法更敏感且成本更低，但是主要的限制是仍存在检测盲区。第四，由于miRNA表达水平会随着生理和病理状态而改变，但目前缺乏可靠的措施标化miRNA表达。

4 问题与展望

循环miRNA在对乳腺癌患者诊断、预后以及疾病的管理方面具有很大的发展前景。目前临床上还没有有效的循环miRNA模板用于肿瘤学实践。这与患者选择不同、分离和测量循环miRNA的技术差异、miRNA低丰度、治疗效果和并发症、样本量不足、统计学分析不当等有关；与样品采集、测量方法和标准化相关的一些步骤，仍然需要进行标准和精简，而目前一些方法正在开发中，以增强检测的灵敏度和特异度，并改善miRNA的临床应用。

[1] Siegel RL，Fedewa SA，Miller KD，et al. Cancer statistics for Hispanics/Latinos，2015[J]. CA Cancer J Clin，2012，65(6):457-480.

[2] 戴丹,徐燕丽.MicroRNA与恶性淋巴瘤相关性研究进展[J].河北医科大学学报,2009,30(10):1106-1108.

[3] Triboulet R，Pirouz M，Gregory RI. A Single Let-7 MicroRNA Bypasses LIN28-Mediated Repression[J]. Cell Rep，2015，13(2):260-266.

[4] Liang Z，Yi B，Zhao H，et al. Abstract 4790:Let-7 mediates sulindac inhibition of tumor cell transformation[J]. Cancer Res，2017，77(13 Suppl):4790.

[5] Chung VY，Tan TZ，Tan M，et al. GRHL2-miR-200-ZEB1 maintains the epithelial status of ovarian cancer through transcriptional regulation and histone modification[J]. Sci Rep，2016，6:19943.

[6] Jurmeister S,Baumann M,Balwierz A,et al. MicroRNA-200c represses migration and invasion of breast cancer cells by targeting actin-regulatory proteins FHOD1 and PPM1F[J]. Mol Cell Biol,2012,32(3):633-651.

[7] Zhang J,Yang J,Zhang X,et al. MicroRNA-10b expression in breast cancer and its clinical association.[J]. PLoS One,2018,13(2):e0192509.

[8] Pratheeshkumar P，Son YO，Divya SP，et al. Quercetin inhibits Cr(VI)-induced malignant cell transformation by targeting miR-21-PDCD4 signaling pathway[J]. Oncotarget，2016，8(32):52118-52131.

[9] Wang X，Hang Y，Liu J，et al. Anticancer effect of curcumin inhibits cell growth through miR-21/PTEN/Akt pathway in breast cancer cell[J]. Oncol Lett，2017，13(6):4825-4831.

[10] Li LQ,Li XL,Wang L,et al. Matrine inhibits breast cancer growth via miR-21/PTEN/Akt pathway in MCF-7 cells[J]. Cell Physiol Biochem,2012,30(3):631-641.

[11] Patel GK，Khan MA，Bhardwaj A，et al. Exosomes confer chemoresistance to pancreatic cancer cells by promoting ROS detoxification and miR-155-mediated suppression of key gemcitabine-metabolising enzyme，DCK[J]. Br J Cancer，2017，116(5):609-619.

[12] Li L，Yuan L，Luo J，et al. MiR-34a inhibits proliferation and migration of breast cancer through down-regulation of Bcl-2 and SIRT1[J]. Clin Exp Med，2013，13(2):109-117.

[13] Li L，Yuan L，Luo J，et al. MiR-34a inhibits proliferation and migration of breast cancer through down-regulation of Bcl-2 and SIRT1[J]. Clin Exp Med，2013，13(2):109-117.

[14] Turley SJ,Cremasco V,Astarita JL. Immunological hallmarks of stromal cells in the tumour microenvironment[J]. Nat Rev Immunol,2015,15(11):669-682.

[15] 高广周,张泽,郝英霞.肿瘤间隙液的研究进展[J].河北医科大学学报,2015,36(11):1359-1362.

[16] Liu Y,Cao X. Characteristics and significance of the pre-metastatic niche[J]. Cancer Cell,2016,30(5):668-681.

[17] Kalluri R. The biology and function of exosomes in cancer[J]. J Clin Invest,2016,126(4):1208-1215.

[18] Gascard P,Tlsty TD. Carcinoma-associated fibroblasts:orchestrating the composition of malignancy[J]. Genes Dev,2016,30(9):1002-1019.

[19] 蔡伟,康骅,刘晨,等.CAFs对乳腺癌细胞生物学特性的影响及机制探讨[J].现代肿瘤医学,2014，22(6):1249-1253.

[20] Swartz MA,Iida N,Roberts EW，et al. Tumor microenvironment complexity:emerging roles in cancer therapy[J]. Cancer Res,2012,72(10):2473-2480 .

[21] Baroni S,Romero-Cordoba S,Plantamura I，et al. Exosome-mediated delivery of miR-9 induces cancer-associated fibroblast-like properties in human breast fibroblasts[J]. Cell Death Dis,2016,7(7):e2312 .

[22] Zhou W,Fong MY,Min Y，et al. Cancer-secreted miR-105 destroys vascular endothelial barriers to promote metastasis[J]. Cancer Cell,2014,25(4):501-515 .

[23] Di Modica M,Regondi V,Sandri M，et al. Breast cancer-secreted miR-939 downregulates VE-cadherin and destroys the barrier function of endothelial monolayers[J]. Cancer Lett,2017,384:94-100 .

[24] Tominaga N,Kosaka N,Ono M，et al. Brain metastatic cancer cells release microRNA-181c-containing extracellular vesicles capable of destructing blood-brain barrier[J]. Nat Commun,2015,6：6716.

[25] He Y,Deng F,Yang S,et al. Exosomal microRNA:a novel biomarker for breast cancer[J]. Biomark Med,2018，12(2)：177-188.

[26] Fong MY,Zhou W,Liu L，et al. Breast-cancer-secreted miR-122 reprograms glucose metabolism in premetastatic niche to promote metastasis[J]. Nat Cell Biol,2015,17(2):183-194.

[27] Hannafon BN,Carpenter KJ,Berry WL，et al. Exosome-mediated microRNA signaling from breast cancer cells is altered by the anti-angiogenesis agent docosahexaenoic acid (DHA)[J]. Mol Cancer,2015,14：133 .

[28] Konstorum A,Lowengrub JS. Activation of the HGF/c-Met axis in the tumor microenvironment:a multispecies model[J]. J Theor Biol,2018,439:86-99.

[29] Yang J,Lu Y,Lin YY,et al. Vascular mimicry formation is promoted by paracrine TGF-β and SDF1 of cancer-associated fibroblasts and inhibited by miR-101 in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Lett,2016,383(1):18-27.

[30] Sun Y,Wang R,Qiao M,et al. Cancer associated fibroblasts tailored tumor microenvironment of therapy resistance in gastrointestinal cancers[J]. J Cell Physiol,2018，233(9)：6359-6369.

[31] Donnarumma E,Fiore D,Nappa M，et al. Cancer-associated fibroblasts release exosomal microRNAs that dictate an aggressive phenotype in breast cancer[J]. Oncotarget,2017,8(12):19592-19608 .

[32] Cuk K，Zucknick M，Madhavan D，et al. Plasma microRNA panel for minimally invasive detection of breast cancer[J]. PLoS One,2013,8(10):e76729.

[33] Shen J，Hu Q，Schrauder M，et al. Circulating miR-148b and miR-133a as biomarkers for breast cancer detection[J]. Oncotarget，2014，5(14):5284-5294.

[34] Kodahl AR，Lyng MB，Binder H，et al. Novel circulating microRNA signature as a potential non-invasive multi-marker test in ER-positive early-stage breast cancer:a case control study[J]. Mol Oncol，2014，8(5):874-883.

[35] Zearo S,Kim E,Zhu Y，et al. MicroRNA-484 is more highly expressed in serum of early breast cancer patients compared to healthy volunteers[J]. BMC Cancer，2014，14:200.

[36] Mangolini A，Ferracin M，Zanzi MV，et al. Diagnostic and prognostic microRNAs in the serum of breast cancer patients measured by droplet digital PCR[J]. Biomark Res，2015，3:12.

[37] Wang PY，Gong HT，Bao-Feng LI，et al. Higher expression of circulating miR-182 as a novel biomarker for breast cancer[J]. Oncol Lett，2013，6(6):1681-1686.

[38] Waters PS，Dwyer RM，Brougham C，et al.Impact of tumour epithelial subtype on circulating microRNAs in breast cancer patients[J]. PLoS One，2014，9(3):e90605.

[39] Xiao B,Zhang W,Chen L,et al. Analysis of the miRNA-mRNA-lncRNA network in human estrogen receptor-positive and estrogen receptor-negative breast cancer based on TCGA data[J]. Gene,2018，658：28-35.

[40] Nassar FJ,El Sabban M,Zgheib NK,et al.miRNA as potential biomarkers of breast cancer in the Lebanese population and in young women:a pilot study[J]. PLoS One,2014,9(9):e107566.

[41] Wang F，Zheng Z，Guo J，et al. Correlation and quantitation of microRNA aberrant expression in tissues and sera from patients with breast tumor[J]. Gynecol Oncol，2010，119(3):586-593.

[42] Joosse SA，Müller V，Steinbach B，et al. Circulating cell-free cancer-testis MAGE-A RNA，BORIS RNA，let-7b and miR-202 in the blood of patients with breast cancer and benign breast diseases[J]. Br J Cancer，2014，111(5):909-917.

[43] Chen W，Cai F，Zhang B，et al. The level of circulating miRNA-10b and miRNA-373 in detecting lymph node metastasis of breast cancer:potential biomarkers[J]. Tumour Biol，2013，34(1):455-462.

[44] Roth C，Rack B，Müller V，et al. Circulating microRNAs as blood-based markers for patients with primary and metastatic breast cancer[J]. Breast Cancer Res，2010，12(6):R90.

[45] Shaker O，Maher M，Nassar Y，et al. Role of microRNAs-29b-2，-155，-197 and -205 as diagnostic biomarkers in serum of breast cancer females[J]. Gene，2015，560(1):77-82.

[46] Huo D，Clayton WM，Yoshimatsu TF，et al. Identification of a circulating MicroRNA signature to distinguish recurrence in breast cancer patients[J]. Oncotarget，2016，7(34):55231-55248.

[47] Eichelser C，Flesch-Janys D，Chang-Claude J，et al. Deregulated serum concentrations of circulating cell-free MicroRNAs miR-17，miR-34a，miR-155，and miR-373 in human breast cancer development and progression[J].Clin Chem，2013，59(10):1489-1496.

[48] Wang H，Tan G,Dong L，et al. Circulating MiR-125b as a marker predicting chemoresistance in breast cancer[J]. PLoS One，2012，7(4):e34210.

[49] Wu X，Somlo G，Yu Y，et al. De novo sequencing of circulating miRNAs identifies novel markers predicting clinical outcome of locally advanced breast cancer[J]. J Trans Med，2012，10:42.

[50] Sun Y，Wang M，Lin G，et al. Serum microRNA-155 as a potential biomarker to track disease in breast cancer[J]. PLoS One，2012，7(10):e47003.

[51] Witwer KW. Circulating microRNA biomarker studies:pitfalls and potential solutions[J]. Clin Chem，2015，61(1):56-63.

[52] Diener Y，Walenda T，Jost E，et al. MicroRNA expression profiles of serum from patients before and after chemotherapy[J]. Genom Data，2015，6:125-127.

[53] Ponomaryova AA，Morozkin ES，Rykova EY,et al. Dynamic changes in circulating miRNA levels in response to antitumor therapy of lung cancer[J]. Exp Lung Res，2016，42(2):95-102.

[作者简介]黄耀孟(1992-),男,河北河间人,河北医科大学医学硕士研究生,从事医学生物化学与分子生物学研究。