热性惊厥患儿外周血NF-κB、NSE的表达及相关因素分析

热性惊厥是儿科急诊最常见的疾病之一，其发生率为2%～5%，为小儿惊厥的主要病因，多见于6个月～3岁婴幼儿[1-2]。因其发病突然、发作时多有意识丧失，往往引起恐慌。热性惊厥的病因复杂，其发病机制尚不完全清楚，可能与中枢神经系统发育不完善、脑内某些因子和介质的变化以及免疫、遗传等因素有关。热性惊厥患儿多数预后良好，但该病复发率高，部分反复热性惊厥患儿可能会转为癫痫。核转录因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)是细胞关键的转录因子之一，在免疫应答、细胞生长、细胞凋亡等多个基因的表达中有调控作用。NF-κB参与了癫痫的病理过程，但具体机制尚不清楚[3]。反复热性惊厥可进展为癫痫，NF-κB在热性惊厥患儿外周血的表达如何，是否与脑损伤相关，目前研究较少。神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)是烯醇化酶超家族成员之一，是脑损伤敏感性及特异性标志物[4]。本研究旨在分析热性惊厥与NF-κB、NSE和乳酸水平变化的相关性及其预后，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2017年4—12月河北省儿童医院急诊科符合诊断的热性惊厥首次发作伴呼吸道感染的患儿100例。其中单纯性热性惊厥患儿(SFS组)58例，男性28例，女性30例，年龄2～6 岁，平均(4.5±1.4)岁；复杂性热性惊厥患儿(CFS组)42例，男性22例，女性20例，年龄1～7岁，平均(4.3±1.2)岁。选取同期入院治疗的发热无惊厥患儿50例为对照组，男性26例，女性24例，年龄2～7岁，平均(4.2±1.8)岁。3组性别、年龄差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 诊断标准[5] 单纯性热性惊厥(simple febrile seizures，SFS)诊断标准：①多为全身性强直-阵挛性发作，部分患者可出现发作后短暂嗜睡；②发作期过后不留任何神经系统后遗症；③排除伴随心血管疾病、颅内感染、癫痫、脑性瘫痪及其他各种脑部器质性病变的惊厥患者。复杂性热性惊厥(complex febrile seizures，CFS)诊断标准：①惊厥发作持续时间≥15 min；②一次热程或24 h发生≥2次；③发生热惊厥后遗留异常神经系统体征，出现后遗症。

本研究经医院伦理委员会批准；患儿家长均签署知情同意书。

1.3 检测方法患儿入院后2 h内抽取静脉血4 mL，加入7.5%乙二胺四乙酸30 μL和40 000 U/mL抑肽酶 40 μL混匀，以3 000 r/min离心10 min，取上清液注入4 ℃的试管，转存于-80 ℃冰箱待测。应用上海科华ST-360酶标仪，采用酶联免疫吸附测定法分别检测外周血清NF-κB、NSE的表达情况。应用丹麦雷度Radiometer ABL800自动生化分析仪检测乳酸、血糖等。所有测定步骤均严格按照操作说明书进行，由专一技师统一操作，剔除溶血标本。

1.4 随访采用电话或家访方式对患儿进行为期6个月的随访，每月1次。

1.5 统计学方法应用SPSS 16.0统计软件分析数据。计量资料比较分别采用单因素方差分析、SNK-q检验和两独立样本的t检验；计数资料比较采用χ2检验；相关性采用Pearson相关分析；采用ROC曲线分析各指标预测患儿预后的价值。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组NF-κB、NSE、乳酸、血糖比较 SFS组和CFS组血清NF-κB、NSE、乳酸、血糖水平均较对照组升高，CFS组NF-κB、NSE、乳酸和血糖又均较SFS组升高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 3组NF-κB、NSE、乳酸、血糖比较
Table 1Comparison of NF-κB,NSE,lactate and blood glucose among 3 groups

2.2 不同惊厥发作次数、惊厥发作持续时间血清NF-κB、NSE、乳酸、血糖水平比较惊厥发作次数≥2次者NF-κB、NSE、乳酸、血糖水平均高于惊厥发作次数<2次者(P<0.05)；惊厥发作时间≥15 min者NF-κB、NSE、乳酸、血糖水平均高于惊厥发作时间<15 min者(P<0.05)。见表2。

表2 不同惊厥发作次数、惊厥发作持续时间血清NF-κB、NSE、乳酸、血糖水平比较
Table 2Comparison of serum NF-κB,NSE,lactate and blood glucose levels in different seizures and duration

2.3 相关性分析患儿惊厥发作次数和惊厥发作持续时间均与NF-κB、NSE、乳酸、血糖水平呈正相关(P<0.05)，见表3。

2.4 NF-κB、NSE、乳酸联合检测对惊厥患儿预后的价值 ROC曲线分析显示，NSE、NF-κB、乳酸对惊厥患儿预后诊断的ROC曲线下面积分别为0.819(95%CI=0.724～0.920)、0.778(95%CI=0.745～0.853)、0.709(95%CI=0.667～0.789)，敏感度分别为84.5%、75.6%、77.8%，特异度为51.2%、66.9%、65.4%；而三者联合ROC曲线下面积为0.838(95%CI=0.791～0.931),敏感度82.2%，特异度70.5%。见图1，表4。

图1 NF-κB、NSE、乳酸联合检测对惊厥患儿预后ROC曲线
Figure 1ROC curve of combined detection of NF-κB，NSE and lactate in children with convulsion

2.5 热性惊厥患儿预后情况比较 6个月内，复杂性热情惊厥患儿复发20例(47.6%)、转为癫痫10例(23.8%)，发生率均高于单纯性热性惊厥复发12例(20.7%)、转为癫痫3例(5.2%)，其差异均有统计学意义(χ2=8.118，P=0.004；χ2=5.648，P=0.017)。

3 讨论

目前，热性惊厥的病因及发病机制尚不明确，国内外的研究主要有以下几方面[6-10]：①热性惊厥有家族聚集性，遗传学和临床研究均证实热性惊厥发病具有显著的遗传倾向，对遗传方式及基因位点的研究已有一定成果；②免疫低下(包括体液免疫和细胞免疫)及细胞因子异常，如白细胞介素6、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α增高；③与缺铁性贫血有关，当贫血或是铁缺乏时，影响大脑神经递质发挥正常功能，使大脑氧化代谢过程受到影响，也可引起神经元发育和髓鞘形成受损，使兴奋易泛化导致惊厥；④在电解质方面，低血钠与热性惊厥发作有密切关系，而低钾与惊厥关系不大。

NSE是烯醇化酶超家族成员之一，是脑损伤敏感性及特异性标志物。当神经系统脑神经元和神经胶质细胞损害时，NSE会释放到脑脊液和血液中，故检测热性惊厥患儿血清NSE的表达水平，可以间接判定热性惊厥患儿惊厥发作后有无脑损伤。热惊性厥对患儿均有不同程度的损伤，而复杂性热惊厥尤其严重[11]。本研究结果显示，惊厥发作次数≥2次者NF-κB、NSE、乳酸、血糖水平均高于惊厥发作次数<2次者；惊厥发作时间≥15 min者NF-κB、NSE、乳酸、血糖水平均高于惊厥发作时间<15 min者。表明发作次数越多、时间越长对脑损伤也越严重，与李宏等[12]研究结论一致。

NF-κB是细胞关键的转录因子之一，在免疫应答、细胞生长、细胞凋亡等多个基因表达中有调控作用。同时，NF-κB被认为是炎症反应的中心环节，可以调控诸多促炎性因子。反复热性惊厥可能发展为癫痫，NF-κB在不同发作时间、不同发作次数的热性惊厥患儿外周血的表达如何，是否与脑损伤相关，目前研究较少。有脑缺血动物模型研究表明NF-κB具有神经保护作用，并且参与惊厥脑损伤的发病过程[13]。本研究中，热性惊厥患儿较未发生惊厥患儿NF-κB水平升高，随着发作次数的增多和持续时间的延长，水平亦升高，且其水平与NSE水平呈正相关性。表明NF-κB参与脑损伤过程，热应激可能使NF-κB激活，至于其激活机制目前不明确，有待进一步研究。本研究中热性惊厥患儿乳酸水平高于未发生惊厥患儿，且随着发作次数增多、持续时间延长乳酸水平升高，尤其是复杂性热性惊厥出现高乳酸血症。表明乳酸水平与脑损伤程度有关[14]。当患儿发生热性惊厥时，会导致呼吸困难，出现低氧而形成高碳酸血症，严重的患儿甚至出现代谢性酸中毒状态，而乳酸是该状态的特异性生化指标。血中乳酸如果大量产生，含量超过5 mmol/L就会出现高乳酸血症，形成乳酸中毒，甚至发展为多脏器功能障碍综合征。

本研究中热性惊厥患儿均出现高血糖，且随着发作次数增多、持续时间延长血糖水平升高。与农少云等[15]报道相一致。热性惊厥患儿由于高热、惊厥、缺氧等，导致交感神经系统、儿茶酚胺、肾上腺皮质激素和胰高血糖素分泌增加，使胰岛素分泌和释放受到抑制，最终导致血糖升高，同时组织细胞利用血糖较少，造成细胞外高糖和细胞内能量缺乏，发生高渗血症。高渗性利尿造成细胞内脱水，可导致意识障碍，加剧惊厥，甚至造成中枢性高热及中枢神经损伤，形成恶性循环。因此，在治疗热性惊厥时，控制血糖水平对惊厥的发生也起到有利作用。

本研究通过ROC曲线下面积对NF-κB、NSE、乳酸联合检测惊厥患儿预后价值进行了分析，其中NSE单独检测对惊厥患儿预后诊断的价值最大，ROC曲线下面积为0.819(95%CI=0.724～0.920)，而三者联合检测ROC曲线下面积为0.838(95%CI=0.791～0.931),高于各指标单独检测。因此，在临床中可通过NF-κB、NSE和乳酸联合检测对惊厥患儿是否复发及恢复情况进行提前预知，以便作好癫痫疾病的防治工作。

综上所述，热性惊厥患儿外周血NF-κB、NSE、乳酸和血糖水平均升高，且随着惊厥次数增加和持续时间延长而升高，NF-κB、NSE和乳酸联合检测对惊厥患儿预后有重要意义，值得临床推广应用。

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热性惊厥患儿外周血NF-κB、NSE的表达及相关因素分析

1 资料与方法

2 结 果

3 讨 论

Expression and correlation of NF-κB and NSE in peripheral blood of children with fevered convulsion

2 结果

3 讨论