摘要: [摘要]〓
〖HTH〗目的〖HTSS〗〖KG*2〗探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)在高糖刺激的人胚肾上皮细胞(human embryo kidney epithelial cells,HKC)内的表达以及与胶原分泌的关系。
〖HTH〗方法〖HTSS〗〖KG*2〗体外培养HKC,分别给予高糖(30 mmol/L)刺激0、6、12、24和48 h后,收集细胞。提取RNA, Realtime PCR检测THEM4 mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot检测THEM4、phosphoAkt(Ser 473)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)、平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,αSMA)的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ,Col Ⅲ)分泌情况。
〖HTH〗结果〖HTSS〗〖KG*2〗① 高糖培养HKC内THEM4表达明显降低,伴随phosphoAkt(Ser 473)、 TGFβ1和αSMA表达上调;THEM4与TGFβ1和αSMA表达呈负相关(分别为:y=-5.100 9x+1.178,R2=0.971 1;y=-3.803 3x+1.408,R2=0.893 9)。 ②高糖可刺激HKC分泌ColⅠ、Col Ⅲ。
〖HTH〗结论〖HTSS〗〖KG*2〗高糖诱导的HKC胶原的分泌可能是通过抑制THEM4表达,上调phosphoAkt(Ser 473)、TGFβ1和αSMA蛋白表达而实现的。