摘要： 目的 构建FLAG标记的内向整流钾通道(inwardly rectifying K channel,Kir)2.3通道蛋白,为进一步研究通道的生理功能和调节机制奠定基础.方法 运用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,将FLAG标记短肽DNA碱基序列插入到Kir2.3通道氨基末端,构建重组质粒DNA,FLAG-Kir2.3-pGEMHE;采用菌落PCR方法挑取阳性克隆,表达于非洲爪蟾卵母细胞,验证加入标记后是否影响Kir2.3通道蛋白的功能;进行免疫细胞化学实验,检测FLAG标记短肽表达情况.结果 经测序验证,FLAG-Kir2.3-pGEMHE重组质粒DNA构建成功,没有碱基突变.FLAG标记短肽没有影响Kir2.3通道功能,FLAG-Kir2.3成功表达于非洲爪蟾卵母细胞,双电极电压钳可以记录到电流.免疫细胞化学实验证实FLAG标记短肽表达.结论 成功构建重组质粒DNA,FLAG标记短肽已与Kir2.3通道蛋白成功融合并有效表达.

中图分类号: 

• R966