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›› 2005, Vol. 26 ›› Issue (6): 409-409.

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人GM-CSF基因的克隆及其稳定表达细胞系的建立

  

  • 发布日期:2005-11-25

  • Published:2005-11-25

摘要: 目的研究和建立人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gramulocyte/macrophase colony-stimulatingfactor,GM-CSF)造血生长因子的高效表达细胞系,以降低生产成本.方法GM-CSF cDNA基因的扩增采用RT-PCR方法;基因转移采用电转移方法;细胞系采用小鼠B淋巴细胞系(L1/2);表达产物鉴定采用Westernblotting、ELISA及其生物活性测定方法.结果将扩增出的GM-CSF cDNA克隆到pcDNA 3.1A载体上,构建成GM-CSF基因的重组表达载体(pcDNA-GMCSF);经电转移将GM-CSF cDNA转移L1/2细胞中,通过G418的筛选,得到稳定表达重组人GM-CSF的细胞系.经过分析证明表达的重组人GM-CSF具有生物学活性,平均表达水平可达850 ng/106细胞.结论本文建立的细胞系能够高效表达具有生物学活性的重组人GM-CSF.

关键词: 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子, 克隆, 分子, 细胞系

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