小鼠生精细胞的体外双室无血清培养

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2016.01.001

河北医科大学学报

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小鼠生精细胞的体外双室无血清培养

(
1. 河北医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,河北石家庄 050017 ; 2. 河北医科大学第一医院肾内科,河北石家庄 050031

出版日期:2016-01-25 发布日期:2016-04-27
作者简介:龚淼( 1983- ),女,河北石家庄人,河北医科大学基础医学院实验师,医学硕士,从事组织胚胎学研究。
基金资助:
河北省自然科学基金项目( H2013201139

Establishmentofculturesystemofmousespermatogeniccellsinvitrowithoutserum

1. DepartmentofHistologyandEmbryology , theSchoolofBasicMedicalScience , HebeiMedical
University , Shijiazhuang 050017 , China ; 2. DepartmentofNephrology ,
theFirstHospitalof
HebeiMedicalUniversity , Shijiazhuang 050017 , China

Online:2016-01-25 Published:2016-04-27

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨无血清条件下应用插入式细胞培养皿( Transwell 小室)对小鼠睾丸间质细胞 - 支持细
胞 - 生精细胞的双室培养技术。方法取 60 日龄 C57BL / 6 雄性小鼠睾丸间质细胞和 15 日龄雄性小鼠睾丸支持细
胞与生精细胞混合细胞团双室共培养,不添加血清。每日在倒置显微镜下观察生精细胞的形态和生长情况,苏木
精染色观察生精细胞形态,染色体倍性分析检测细胞分化情况。结果在培养 1 周后,可见圆形精子细胞出现, 2 周
后可见长形精子细胞,
3 周后可见较短鞭毛,生精细胞可存活 8 周;培养 1 周时,流式细胞术可检测出单倍体细胞,
单倍体细胞百分比随培养时间延长而增加。结论应用双室无血清培养体系体外培养小鼠生精细胞可获得精子且
生精细胞存活时间较长。

关键词: 精细胞, 细胞培养技术, 小鼠

Abstract: Objective ToestablishamouseLeydigcell-Sertolicell-germcelldouble-chamber
coculturesysteminvitro withoutserum.Methods TheLeydigcellswereisolatedfromthe
testesofpostnatalday60maleC57BL / 6mice.TotalgermcellsandSertolicellswereisolated
fromthetestesofpostnatalday15maleC57BL / 6mice.Thecellsinbicameralchambersculture
system weregrowninmediawithoutserum.Themorphologyandgrowthofculturecellswere
monitoreddailyundercontrastphasemicroscope , andwereidentifiedbyHematoxylinstaining.
Ploidyanalysisofcellswasobservedbyflowcytometry.Results Inbicameralculturesystem ,
sporadicround spermatids were detected after one week , and elongating spermatids or
spermatidswithflagellawereobservedafterthreeweeks.Thespermatogeniccellssurvivedas
longaseightweeks.Thehaploidpeakwasdetectedafteroneweek ; thepercentageofmonoploid
increasedwithculturetime.Conclusion Thespermatogeniccellsinbicameralculturesystem
maturedintomorphologicallynormalspermatozoaandsurvivedlonger.

Key words: permatids , cellculturetechniques , mice

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