摘要: [摘要]〓
〖HTH〗目的〖HTSS〗〖KG*2〗探讨黄芪甲苷Ⅳ可以体外诱导SAMR1小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化为神经细胞,证明其诱导作用对Notch1和βcatenin的影响。
〖HTH〗方法〖HTSS〗〖KG*2〗采用全骨髓贴壁培养法培养SAMR1小鼠的BMSCs;流式细胞技术检测其CD29,CD34,CD90的表达;以0,20,40,80,160,320 g/L浓度黄芪甲苷Ⅳ诱导BMSCs,分别在0,1,6,12,24,48,72 h免疫荧光检测其NSE和Nestin的表达;Western blot检测诱导过程中Notch1和βcatenin蛋白的表达;应用RTqPCR检测诱导后Nestin、NSE、Notch1、βcatenin mRNA的表达。
〖HTH〗结果〖HTSS〗〖KG*2〗SAMR1小鼠BMSCs培养至第3代,细胞基本呈长梭形,细胞体积增大,基本纯化;流式细胞技术检测CD29(+)、CD34(-)、CD90(+),证实其为BMSCs;通过对不同浓度诱导效果的统计分析得出,20,40,80 g/L黄芪甲苷Ⅳ诱导组(T1,T2,T3)诱导后,NSE和Nestin表达明显高于对照组,在组间、时点间、组间·时点间交互作用差异均有统计学意义(P<005),160,320 g/L(T4,T5)浓度组细胞出现死亡现象;诱导后1 h细胞开始表达NSE和Nestin,48 h后诱导效果明显下降, 6,12,24 h诱导效果较好,也无明显差异;40 g/L组诱导12 h神经细胞表达量最高。Western blot检测结果显示,诱导组Notch1蛋白表达低于对照组,诱导组βcatenin 蛋白表达显著高于对照组;RTqPCR结果显示,诱导后Nestin、NSE mRNA表达高于对照组(P<005),诱导组Notch1 mRNA表达低于对照组(P<005),诱导组βcatenin mRNA表达高于对照组(P<005)。
〖HTH〗结论〖HTSS〗〖KG*2〗黄芪甲苷Ⅳ可以诱导SAMR1小鼠BMSCs体外分化为神经细胞, 40 g/L浓度诱导12 h效果较好。黄芪甲苷Ⅳ诱导分化过程中,通过提高βcatenin蛋白和mRNA的表达,抑制Notch1蛋白和mRNA的表达,从而促进BMSCs分化为神经细胞。