SD大鼠腹腔脂肪干细胞分离培养和鉴定

doi:10.3969/j.issn.10073205.2017.03.003

河北医科大学学报

SD大鼠腹腔脂肪干细胞分离培养和鉴定

1.承德医学院附属医院呼吸内科，河北承德 067000；2.中国人民解放军总医院呼吸内科，北京 100853

出版日期:2017-03-25 发布日期:2017-03-29
作者简介:张洋洋(1983-)，女，河北承德人，承德医学院附属医院主治医师，医学硕士，从事呼吸内科疾病诊治研究。

1.Department of Respiratory Medicine, Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Heibei
Province, Chengde 067000, China; 2.Department of Respiratory Medicine,
Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

Online:2017-03-25 Published:2017-03-29

摘要/Abstract

摘要： ［摘要］〓
〖HTH〗目的〖HTSS〗〖KG*2〗建立一种有效的分离、培养SD大鼠腹腔脂肪干细胞（adipose tissuederived stem cells，ASCs）的方法，从而为大鼠间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的来源提供更广阔的选择。
〖HTH〗方法〖HTSS〗〖KG*2〗取4周龄雄性SD大鼠的腹腔脂肪组织，经0.1%Ⅰ型胶原酶消化，离心、洗涤后间充质干细胞专用培养基重悬，置于细胞孵箱中培养，长至80%融合后用0.25%胰酶EDTA消化、传代培养，绘制细胞生长曲线，进行细胞形态、表面标志、成骨及成脂分化潜能鉴定。
〖HTH〗结果〖HTSS〗〖KG*2〗ASCs贴壁生长，原代ASCs呈短小梭形，经传代后和培养时间的延长，细胞变为长梭形，旋涡状排列。培养第2、4、5、6 d时，第5代的ASCs A值低于第3代，第8代的ASCs A值低于第3代和第5代，差异均有统计学意义（P＜005）。ASCs阳性表达CD29、CD54、CD90.1，不表达CD31、CD45、CD106。
〖HTH〗结论〖HTSS〗〖KG*2〗通过贴壁培养可以从SD大鼠腹腔脂肪组织分离培养出高纯度的ASCs，此种方法获得的ASCs增殖速度快，可以成为SD大鼠MSC的来源。


关键词: 间质干细胞, 细胞培养, 生长曲线, 脂肪组织, 大鼠

Abstract: ［Abstract］ Objective〖HTSS〗〓To establish an effective and simple method for isolation and expansion of the adipose tissuederived stem cells(ASCs), by using the adipose tissues of abdominal cavity of Sprague Dawley rat, and to provide another choice for cell source of mesenchymal stem cells（MSCs）.
〖HTH〗〖WTHZ〗Methods〖HTSS〗〓The adipose tissues were obtained from the abdominal cavity of Sprague Dawley rats aged 4 weeks. 0.1% collagenase Ⅰ was chosen for digesting the adipose tissues. After washing and centrifugation, the cells were resuspended in mesenchymal stem cell medium and cultured in cell incubator. The growth rate was assessed by MTT assay. ASCs were then verified by the flow cytometry analysis and differentiation assays.
〖HTH〗〖WTHZ〗Results〖HTSS〗〓ASCs were spindlelike in shape and adhered to the plastic tissue culture medium, with high multiplication rate. The absorbance value of passage 5 was lower passage 3, and the absorbance value of passage 8 was lower than passage 3 and passage 5 on day 2, 4, 5 and 6（P＜005）. ASCs were positive for CD29, CD54 and CD90.1, but negative for CD31, CD45 and CD106.
〖HTH〗〖WTHZ〗Conclusion〖HTSS〗〓ASCs can be effectively isolated and expanded from the adipose tissues of abdominal cavity of Sprague Dawley rat, by using adherent culture. And ASCs from adipose tissues of abdominal cavity may be a good multipotential cell candidate for future cell replacement therapy.

Key words: mesenchymal stem cells, cell culture technique, growth charts, adipose tissue, rats

张洋洋1，陈良安2. SD大鼠腹腔脂肪干细胞分离培养和鉴定[J]. 河北医科大学学报, doi: 10.3969/j.issn.10073205.2017.03.003.

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